El Núcleo Zoológico de Madrid cuenta con una normativa específica para el funcionamiento de este espacio. La normativa establece unas pautas a seguir por todos los usuarios para el uso del Núcleo Zoológico de Madrid.
Entre las pautas establecidas en la normativa se encuentran: el horario de apertura al público, el acceso a los animales, el comportamiento en el espacio, las prohibiciones y las sanciones.
La normativa establece que el horario de apertura al público es de lunes a viernes de 10:00 a 18:00 horas, sábados, domingos y festivos de 10:00 a 19:00 horas. El acceso a los animales está prohibido. El comportamiento en el espacio debe ser respetuoso con los animales y las instalaciones.
Las prohibiciones establecidas en la normativa son: el acceso a los animales, la mascotas, el consumo de alimentos y bebidas, el deporte y el baño. Las sanciones establecidas en la normativa son: la multa o el expulsión del espacio.